pCMV-C-His是晶安生物自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端和His tag(His标签)融合的目的蛋白
的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码His标签的序列,因此可以表达出含有His标签的融合蛋白,可以方便地使用抗 His的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-C-His质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide &nb sp; Position
CMV promoter &nb sp; 1–602
T3 promoter and T3 primer binding site 620–639
multiple cloning site &nb sp; 680-740
c-His tag &nb sp; 741-758
T7 promoter and T7 primer binding site 811–832
SV40 polyA signal &nb sp; 844–1227
f1 origin of ss-DNA replication &nb sp; 1365–1669
bla promoter &nb sp; 1694–1818
SV40 promoter &nb sp; 1838–2176
neomycin/kanamycin resistance ORF 221 1–3002
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3003–3461
pUC origin &nb sp; 3590–4257
pCMV-C-His质粒的图谱如下:
pCMV-C-His的多克隆位点的详细图谱如下:
&nb sp; XmaI PstI
SacI SmaI BamHI HindIII
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
&nb sp; His tag
EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI XbaI H H H H
701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA CATCATCACC
CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT GTAGTAGTGG
H H ApaI
751 ATCACCATTA AGGGCCCGGT ACCTTAATTA ATTAAGGTAC CAGGTAAGTG
TAGTGGTAAT TCCCGGGCCA TGGAATTAAT TAATTCCATG GTCCATTCAC
pCMV-C-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-His)包括:
Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I
Bsg I BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I
BstE II Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I
Nru I PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I
Sca I Spe I
pCMV-C-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-His once)包括:
Nde I CA`TA,TG 241
SnaB I TAC|GTA 347
Nhe I G`CTAG,C 598
Sac I G,AGCT`C 656
Sac II CC,GC`GG 663
BstX I CCAN,NNNN`NTGG 664
Not I GC`GGCC,GC 669
PspA I C`CCGG,G 681
Xma I C`CCGG,G 681
Srf I GCCC|GGGC 683
Sma I CCC|GGG 683
BamH I G`GATC,C 688
Hind III A`AGCT,T 694
Pst I C,TGCA`G 704
EcoR I G`AATT,C 706
EcoR V GAT|ATC 714
Sal I G`TCGA,C 718
Acc I GT`MK,AC 719
Bgl II A`GATC,T 724
PaeR7 I C`TCGA,G 730
Xho I C`TCGA,G 730
Xba I T`CTAG,A 736
Bsp120 I G`GGCC,C 763
Apa I G,GGCC`C 767
Pvu I CG,AT`CG 845
Bcl I T`GATC,A 999
Mun I C`AATT,G 1092
Hpa I GTT|AAC 1105
Mlu I A`CGCG,T 1228
Dra III CAC,NNN`GTG 1458
Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 2115
BseR I GAGGAG 16/14 2158
Stu I AGG|CCT 2161
Cla I AT`CG,AT 2180
Kas I G`GCGC,C 2339
Nar I GG`CG,CC 2340
Ehe I GGC|GCC 2341
Bbe I G,GCGC`C 2343
Msc I TGG|CCA 2422
Tth111 I GACN`N,NGTC 2458
BsrD I GCAATG, 8 2573
Bsp1286 I G,DGCH`C 2643
Rsr II CG`GWC,CG 2856
BsiC I TT`CG,AA 3022
BstB I TT`CG,AA 3022
Bsa I GGTCTC 7/11 3329
HgiE II ACCNNNNNNGGT-1/13 3669
ApaL I G`TGCA,C 3944