pCMV-N-HA是晶安生物自行研發的用于在哺乳動物細胞中表達N端和HA tag(HA標簽)融合的目的蛋白
的表達質粒。含有CMV啟動子可以高效啟動目的蛋白在細胞中的表達;在多克隆位點的5'端含有一個可以編碼HA標簽的序列,因此可以表達出含有HA標簽的融合蛋白,可以方便地使用抗HA的 抗體來識別目的蛋白,有利于目的蛋白檢測和分離純化。質粒為卡那霉素抗性。轉染細胞后,可使用G418篩選穩定表達目的蛋白的細胞株。
pCMV-N-HA質粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide &nb sp; Position
CMV promoter &nb sp; 1–602
T3 promoter and T3 primer binding site 620–639 HA tag &nb sp; 679–705
multiple cloning site &nb sp; 708–781
T7 promoter and T7 primer binding site 824–845 SV40 polyA signal &nb sp; 857–1240
f1 origin of ss-DNA replication &nb sp; 1378–1684
bla promoter &nb sp; 1709–1833
SV40 promoter &nb sp; 1853–2191
neomycin/kanamycin resistance ORF &nb sp; 2226–3017
HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal 301 8–3476
pUC origin &nb sp; 3605–4272
pCMV-N-HA質粒的圖譜如下:
pCMV-N-HA的多克隆位點的詳細圖譜如下:
&nb sp; HA tag
SacI M Y P Y D V P D Y
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCCATGTA CCCATACGAT GTTCCAGATT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGGTACAT GGGTATGCTA CAAGGTCTAA XmaI PstI
A SmaI BamHI HindIII EcoRI EcoRV SalI
701 ACGCTAGCCC GGGCGGATCC AAGCTTCTGC AGGAATTCGA TATCGTCGAC
TGCGATCGGG CCCGCCTAGG TTCGAAGACG TCCTTAAGCT ATAGCAGCTG
BglII XbaI SpeI ApaI
751 AGATCTCTCG AGTCTAGAAC TAGTGGGCCC GGTACCTTAA TTAATTAAGG
TCTAGAGAGC TCAGATCTTG ATCACCCGGG CCATGGAATT AATTAATTCC
pCMV-N-HA中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-HA)包括:
Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I
Bsg I BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I
BstE II Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I
Nru I PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I
Sca I Spl I
pCMV-N-HA中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pCMV-N-HA once)包括:
Nde I CA`TA,TG 241
SnaB I TAC|GTA 347
Sac I G,AGCT`C 656
Sac II CC,GC`GG 663
BstX I CCAN,NNNN`NTGG 664
Not I GC`GGCC,GC 669
PspA I C`CCGG,G 709
Xma I C`CCGG,G 709
Srf I GCCC|GGGC 711
Sma I CCC|GGG 711
BamH I G`GATC,C 716
Hind III A`AGCT,T 722
Pst I C,TGCA`G 732
EcoR I G`AATT,C 734
EcoR V GAT|ATC 742
Sal I G`TCGA,C 746
Acc I GT`MK,AC 747
Bgl II A`GATC,T 752
PaeR7 I C`TCGA,G 758
Xho I C`TCGA,G 758
Xba I T`CTAG,A 764
Spe I A`CTAG,T 770
Bsp120 I G`GGCC,C 776
Apa I G,GGCC`C 780
Pvu I CG,AT`CG 858
Bcl I T`GATC,A 1012
Mun I C`AATT,G 1105
Hpa I GTT|AAC 1118
Mlu I A`CGCG,T 1241
Dra III CAC,NNN`GTG 1471
Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 2130
BseR I GAGGAG 16/14 2173
Stu I AGG|CCT 2176
Cla I AT`CG,AT 2195
Kas I G`GCGC,C 2354
Nar I GG`CG,CC 2355
Ehe I GGC|GCC 2356
Bbe I G,GCGC`C 2358
Msc I TGG|CCA 2437
Tth111 I GACN`N,NGTC 2473
BsrD I GCAATG, 8 2588
Bsp1286 I G,DGCH`C 2658
Rsr II CG`GWC,CG 2871
BsiC I TT`CG,AA 3037
BstB I TT`CG,AA 3037
Bsa I GGTCTC 7/11 3344
HgiE II ACCNNNNNNGGT-1/13 3684
ApaL I G`TGCA,C 3959