pCMV-N-Myc是晶安生物自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和Myc tag(Myc标签)融合的目的蛋白
的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码Myc标签的序列,因此可以表达出含有Myc标签的融合蛋白,可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-Myc质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1–602
T3 promoter and T3 primer binding site 620–639
Myc tag 679–708
multiple cloning site 711–784
T7 promoter and T7 primer binding site 827–848
SV40 polyA signal 860–1243
f1 origin of ss-DNA replication 1381–1687
bla promoter 1712–1836
SV40 promoter 1856–2194
neomycin/kanamycin resistance ORF 2229–3020
HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal 3021–3479
pUC origin 3608–4275
pCMV-N-Myc质粒的图谱如下:
pCMV-N-Myc的多克隆位点的详细图谱如下: Myc tag
SacI M E Q K L I S E E
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCCATGGA GCAGAAACTC ATCTCTGAAG
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGGTACCT CGTCTTTGAG TAGAGACTTC XmaI PstI
D L SmaI BamHI HindIII EcoRI EcoRV SalI
701 AGGATCTGAG CCCGGGCGGA TCCAAGCTTC TGCAGGAATT CGATATCGTC
TCCTAGACTC GGGCCCGCCT AGGTTCGAAG ACGTCCTTAA GCTATAGCAG
BglII XhoI XbaI SpeI ApaI KpnI
751 GACAGATCTC TCGAGTCTAG AACTAGTGGG CCCGGTACCT TAATTAATTA
CTGTCTAGAG AGCTCAGATC TTGATCACCC GGGCCATGGA ATTAATTAAT
pCMV-N-Myc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-Myc)包括:
Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I
Bsg I BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I
BstE II Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I Nru I
PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I Sca I
Spl I Xca I
pCMV-N-Myc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-Myc once)包括:
Nde I CA`TA,TG 241
SnaB I TAC|GTA 347
Nhe I G`CTAG,C 598
Sac I G,AGCT`C 656
Sac II CC,GC`GG 663
BstX I CCAN,NNNN`NTGG 664
Not I GC`GGCC,GC 669
Ear I CTCTTC 7/10 693
PspA I C`CCGG,G 712
Xma I C`CCGG,G 712
Srf I GCCC|GGGC 714
Sma I CCC|GGG 714
BamH I G`GATC,C 719
Hind III A`AGCT,T 725
Pst I C,TGCA`G 735
EcoR I G`AATT,C 737
EcoR V GAT|ATC 745
Sal I G`TCGA,C 749
Acc I GT`MK,AC 750
Bgl II A`GATC,T 755
PaeR7 I C`TCGA,G 761
Xho I C`TCGA,G 761
Xba I T`CTAG,A 767
Spe I A`CTAG,T 773
Bsp120 I G`GGCC,C 779
Apa I G,GGCC`C 783
Pvu I CG,AT`CG 861
Bcl I T`GATC,A 1015
Mun I C`AATT,G 1108
Hpa I GTT|AAC 1121
Mlu I A`CGCG,T 1244
Dra III CAC,NNN`GTG 1474
Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 2133
BseR I GAGGAG 16/14 2176
Stu I AGG|CCT 2179
Cla I AT`CG,AT 2198
Kas I G`GCGC,C 2357
Nar I GG`CG,CC 2358
Ehe I GGC|GCC 2359
Bbe I G,GCGC`C 2361
Msc I TGG|CCA 2440
Tth111 I GACN`N,NGTC 2476
BsrD I GCAATG, 8 2591
Bsp1286 I G,DGCH`C 2661
Rsr II CG`GWC,CG 2874
BsiC I TT`CG,AA 3040
BstB I TT`CG,AA 3040
Bsa I GGTCTC 7/11 3347
HgiE II ACCNNNNNNGGT-1/13 3687
ApaL I G`TGCA,C 3962